灵芝孢子粉药理作用研究进展

所在分类:科研文献 核心内容:
刘虹,周甄鸿,刘志宏
 
关键词灵芝孢子粉;药理作用;研究进展
 
    灵芝是一种珍贵的药用真菌,传统的药用部位仅限于其 子实体。近年来随着人工栽培技术和孢子破壁技术的发展, 使得灵芝孢子(粉)作为灵芝的又一药用部位逐渐为人们所 认识,对灵芝孢子粉的研究日益增多。本文拟综述近几年来 灵芝孢子粉药理作用的研究概况。
 
1抗癌作用
 
 
     灵芝孢子粉有明显的抑制移植性动物肿瘤小鼠肝癌肿瘤、小鼠肉瘤一180(s一180)及小鼠网细胞肉瘤(L一Ⅱ)生长的 作用。在2~8 g/(kg.d)的剂量范围内灌胃(ig)给药7 d后对 小鼠肝癌、s一180和L一Ⅱ的抑瘤率分别在522%~86.1%、 44 9% ̄82.o%和54.09分呵9,6%之间,并且有明显的量效关系'"。 灵芝孢子粉的醇提取物在体外具有直接抑制癌细胞生长的 作用。灵芝孢子粉醇提取物在1 mgm】I时对人官颈癌细胞 HeLa、人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞sGc79叭、人白血病 细胞HL60和来源于小鼠的白血病细胞L1210均具有较强的 杀伤能力"。
 
     灵芝孢子粉对荷HAC肝癌小鼠T细胞表面分化抗原、 体外细胞杀功能以及肿瘤抑制率的影响结果表明:实验小鼠 总T细胞、T辅助细胞明显上升。在对小鼠肝癌细胞株 HAc、小鼠白血病细胞株YAc一1和小鼠肥大细胞性自血病 细胞株p815肿瘤细胞的杀伤活性中灵芝孢子粉组的杀伤活 性分别为27跏、234%和20.册,灵芝孢子粉的总抑瘤率为 422%。说明灵芝孢子粉能激活和提高特异性(cTL)和非特异性杀伤细胞(NK、LzK)的抗肿瘤作用,抑制肿瘤细胞增殖w。
 
  2免疫作用
 
     灵芝孢子粉能激活巨噬细胞的吞噬功能,对糖皮质激素 有拈抗作用。灵芝孢子粉水提取物能提高小鼠腹腔巨噬细胞 酸性磷酸酶、B一葡萄糖醛酸酶活性及过氧化氢含量,并能对 抗糖皮质激素对小鼠脾脏DNA合成的抑制作用及促进肝脏 脂肪堆积的作用"。给小鼠服食灵芝孢子粉对小鼠腹腔巨噬 细胞吞噬和血清凝集功能有增强作用。小鼠脾指数和酸性非 特异性酯酶染色也相应增加。说明灵芝孢子粉能增强非特异性免疫功能,提高体液免疫水平和细胞免疫水平"。 
 
    萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞白介素一2(Inte卜 l即kin一2,IL一2)分泌有明显的促进作用,能明显提高小鼠脾 淋巴细胞转化增殖率"。提示:灵芝孢予粉引起的淋巴细胞转 化率的提高及IL一2分泌的增多是其对机体的免疫凋节功能 体现之一。
 
   灵芝孢子粉灌胃(2以g),除胸腺指数外给药小鼠半数 溶血值、血碳清除率、足跖厚差、脾脏指数与正常对照组相比 差异显著或非常显著。说明灵芝孢子粉可较全面地提高小鼠 免疫功能1。
 
3保肝作用
 
     灵芝孢子粉对D~氨基半乳糖所致肝损害的保护作用: 试验小鼠灌胃(ig)及腹腔注射(ip)两种途径给药,单用组小 鼠肝功能ALT活性明显升高,细胞出现气球样肿胀及点状 坏死,肝脏受损严重,受试小鼠死亡率高,与生理盐水对照组 有极显著的差异。而D一氨基半乳糖与灵芝孢子粉同时使用 时与生理盐水对照组相比小鼠已无死亡现象,半数小鼠肝脏 病理学检查趋于正常。ALT活性与对照组相比虽仍有差异,但较之单用组已显著降低(P<o 05)刚。说明灵芝孢子粉对 D一氨基半乳糖所致肝损伤具有明显的拈抗作用。
 
4降血脂作用
 
口服灵芝孢子粉对正常大鼠血清总胆固醇(|rcHo)和 甘油三酯(TG)无明显影响,而能明显降低高血脂大鼠的血 清总胆回醇和甘油三酯水平。对高缸脂大鼠ig灵芝孢于粉 (1 0~5.0 g/kg)后,TcHo降低43 9%一56 1%,TG降低了 36 5%~52 5%。其作用强度比氯贝丁脂500 m∥kg高1…。南京 张卫明等…研究表明:灵芝孢子粉在500 n1毋g剂量时.具有 降低血清TcHo及7rG的作用,而对大鼠血清高密度脂蛋 白腿固醇(HcL—c)无影响。
 
5降血糖作用
 
    四氧嘧啶能选择性地破坏胰岛B细胞。灵芝孢子粉醇提 取物的水溶成分(Ganodelltla lucldum 8Pore ex昀ct,Gbe)对小 鼠由四氧嘧啶引起的糖尿病的诱发有明显的防治作用㈦。提 示:Glse可能减弱四氧嘧啶对胰岛B细胞的损伤或改善受损 伤的B细胞的功能。 肾上腺素能促进肝脏和肌糖元的分解而引起血糖升高, Glse亦能拮抗正常小鼠因ip葡萄糖或肾上腺索引起的升血 糖作用,改善糖尿病小鼠的葡萄糖耐量。表明GIse可能抑制了 糖元的分解。糖尿病患者多饮、多食症状十分突出,Glse能减 少糖尿病小鼠的饮水量。此作用可能有益于缓解病人的症状。 用链脲菌素(slz)复制太鼠糖尿病模型观察G】se降血糖 作用表明,Gbe(相当于给药6.25 g/kg)对糖尿病大鼠有明显 的降低血糖的作用,增强耐糖效应,对stz损伤后的生长激素 (GH)升高和皮质醇(cor)降低有稳定和保护作用,对糖尿病 大鼠的Ins分泌有促进作用'Ⅷ。
 
6抗缺氧能力
 
    将Glse注射受试小鼠,在无氧条件下,小鼠生存时间显 著延长,并且有量敢关系"41。推测孢子粉能增强血液中红细胞 和血红蛋白的含量,提高机体的带氧或合氧功能,并能降低 机体耗氧量。
 
7对神经系统的作用
 
    Glse能明显减少小鼠自主活动,延长戊巴比妥睡眠,减 少烟碱引起的死亡,减少唾液分泌及使正常动物体温下降并 随作用剂量的增加而增强叫。灵芝孢子粉先用乙醚脱脂后再 用乙醇回流,得到的提取渡浓缩至膏状后制成水剂,也能使 小鼠自主活动明显减少并可延长小鼠的睡眠时间旧。推测:这 正是临床用于治疗内脏多动,精神紧张等疾病效果较好坶的 药理学基础。
 
8抗炎作用
 
    在注射Glse后立即于左耳涂2%巴豆油溶液0 05 mL. 4 h后杀死小鼠,取两耳用直径8一圆冲冲出耳片,以左右 耳片重量表示肿胀程度。结果表明,灵芝孢子粉制剂能抑制 耳肿胀,有一定的抗炎作用。
 
    中国医学科学院顾欣等。1啊用2-4一二氯苯氧乙酸(2.4—D) 引起小鼠肌损伤以使血清磷酸肌酸澈酶(scPK)升高,同时肌 肉磷酸肌酸激酶(McPK)下降。另用豚鼠肌浆免疫建立的大鼠过敏眭肌炎模型发现:灵芝孢子粉对这种与人类疾病相似 的动物模型有纠正作用。此外,灵芝孢于粉对小鼠迟发型超 敏性皮肤炎症亦有抑制作用。提示灵芝孢于粉对肌肉损伤和 炎症确有保护作用。
 
9清除自由基的作用
 
    灵芝孢子粉水提取物可抑制小鼠肌肉匀浆的自发性脂 质过氧化和Fe2+/半胱胺酸引起的脂质过氧化,使丙二醛 (MDA)生成量减少,并能抑制黄瞟呤氧化酶/黄嘌呤系统中 超氧阴离子的生成。此外还可降低2.4一二氧苯氧乙酸引起的 小鼠血清MDA升高,使正常小鼠肝胞浆中能清除自由基过 氧化酶活性明显提高,加速括性氧自由基反应中生成的过氧 化氢的水解I】目。说明灵芝孢子粉对细胞损伤的保护作用可能 是作为活性氧自由基的捕获剂。清除超氧阴离子等自由基。 但灵芝孢子粉对超氧化物歧化酶(s0D)及谷胱甘肽过氧化 物酶(GsH—Px)的活性无明显影响。
 
参考文献:
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 灵芝孢子粉药理作用研究进展
 
作者:刘虹, 周甄鸿, 刘志宏
 
作者单位:刘虹(300203,天津医科大学制药厂), 周甄鸿,刘志宏(300122,天津乐仁堂制药厂)
 
刊名:天津中医学院学报
 
英文刊名:JOURNAL OF TIANJIN COLLEGE OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
 
年,卷(期):2002,21(4)
 
 
被引用次数: 26次
 
参考文献(18条)
 
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1.会议论文 易有金.胡瞬.熊兴耀.李宗军.钟英丽.童志丹 灵芝孢子粉研究进展 2009
 
    灵芝孢子是含有灵芝全部遗传活性物质的生殖细胞,其活性成分的药理越来越受到重视。本文系统地综述了近年来有关灵芝孢子粉的研究近况,包括 抗肿瘤、免疫调节、神经系统保护等方面的药理作用、临床应用,分析了目前其研究应用存在的问题,为以后的研究发展提供理论依据。
 
2.期刊论文 王云.杨晋明.王洋 灵芝孢子粉免疫调节作用研究 -中国食用菌2002,21(1)
 
    灵芝孢子粉是近年来开发的新资源食品.据资料记载,灵芝对人体机能具有多方面的调节作用,灵芝孢子粉是灵芝的繁殖器官,集中了灵芝的精华,因而 具有比灵芝更好的药理作用.为了切实了解灵芝孢子粉的药理作用,我们采用了本单位生产的神力源牌灵芝孢子粉,对其调节免疫作用进行了研究,现将结 果报告如下.
3.学位论文 龙亚秋 灵芝孢子粉对大鼠肝硬化的影响研究 2009
 
    目的及意义:
    肝硬化是一种以肝组织弥漫性纤维化、假小叶形成和再生结节形成为特征的慢性肝病。临床上有多系统受累,以肝功能损害和门静脉高压为主要表 现,晚期常出现消化道出血、肝性脑病、继发感染等严重并发症。肝硬化是我国常见疾病和主要死亡病因之一,我国肝硬化占内科总住院人数的4.3%- 14.2%,发病高峰在35-48岁,男女比例约为3.6-8:1,严重影响患者健康与生命。
     治疗上,目前临床尚无特效药,平日可用维生素和消化酶,并针对门脉高压及并发症等给予对症支持处理。近年来对于肝硬化的治疗,一些学者研 究制定了防治肝纤维化策略,并且已经开始探索从发病机制入手的基因调控与治疗,但只是在动物实验中有进展,抗肝纤维化、肝硬化的临床治疗尚未 有突破,所以进一步探讨抗肝纤维化、肝硬化特别是中药领域有更重要的意义。
     在我国,灵芝药用已有2000多年的历史,其子实体、孢子粉、菌丝体均可入药,现代药理研究表明,灵芝孢子粉具有许多的药理作用:抗肿瘤、增 加免疫调节、保护肝脏、抗病毒、对神经系统的影响、降血糖、降血脂、镇痛、抗缺氧能力、抗炎等。另外,灵芝类产品在大量的动物试验中,无论在 急性毒性方面、长期摄入引起对机体的损害方面和致突变及对子代胚胎的发育方面,均未见有毒性表现的报道。可以认为,灵芝是安全无毒并无潜在致 突变性及无对子代产生不良影响的。
     本实验拟初步观察灵芝孢子粉对大鼠肝硬化的影响,为临床上预防和治疗肝硬化提供有意义的基本的实验依据和参考。
     实验材料与方法: 
 
    1.主要药物与仪器:
    灵芝孢子粉由东北长白山红星农场提供;四氯化碳、羧甲基纤维素钠(分析纯)等均购自南方医科大学试剂中心;全自动生化分析仪,型号 :ECHOLCO,厂家:乐高特。
    2.分组与给药:
    实验中采用完全随机化的分组方法,将实验动物分成4组,即对照组、模型组,灵芝孢子粉低剂量组、灵芝孢子粉高剂量组。对照组及模型组按 10ml/kg体质量每日灌胃灌胃给予0.9%氯化钠溶液(NS),灵芝孢子粉低剂量组按10ml/kg体质量每日灌胃给予0.05%灵芝孢子粉悬浊液,灵芝孢子粉高 剂量组按10ml/kg体质量每日灌胃予0.20%灵芝孢子粉悬浊液。
    3.模型:
    需造模组大鼠灌胃同时按0.3ml/100g体质量给予40%四氯化碳菜籽油溶液2周,2周后改为50%四氯化碳菜籽油溶液,应用2周,从第5周改为60%四氯 化碳菜籽油溶液,应用4周,腹腔注射,每周2次。第1、2周给予5%乙醇溶液作为饮用水,第3、4周给予10%乙醇溶液作为饮用水,第5~8周给予20%乙醇 溶液作为饮用水(乙醇溶液由上述白酒加蒸馏水配制)。共诱导8周,给予普通颗粒饲料及葵花籽喂养,复制大鼠肝硬化动物模型;同时通过监测体重初 步估计肝功能有无衰竭的可能,以降低造模造成的死亡率。
    4.观察、检测指标:
    实验至8周末,禁食、不禁水16小时,10%水合氯醛麻醉,开腹经腹主动脉留取动脉血的样本约5 ml,离心取血清以进行血生化等检测;取脏器(肝 脏、脾脏),使用1/10000的电子称称量脏器湿重以计算脏器指数;将肝脏取材修剪后放入10%福尔马林中固定,以制作病理切片。
    5.统计方法:
    实验数据均以均数±\u26631X准差(x±S)表示,数据用SPSS13.0统计软件进行处理。血液生化学、脏器湿重和脏器系数等数据,采用One-Way ANOVA;方差齐性时各组之间多重比较采用LSD检验;方差不齐时采用近似方差分析Welch法,各组之间多重比较采用Dunnett T3检验。以上检验以 P<0.05为差异有统计学意义。
    结果与分析:
    1.实验至8周末,对照组大鼠营养状况良好,行为、运动状态未见明显异常,摄食、摄水及大便未见明显异常,眼、耳、鼻、口未见异常分泌物,被 毛色白,对外界刺激的反应正常,逃跑1只大鼠。模型组大鼠腹部膨隆,毛质粗糙,消瘦,精神萎靡,动作迟钝,易激惹,个别大鼠趾甲易出血,有的大 鼠头颈背部、眼眶周围及前肢出现轻度脱毛,毛色光亮,脱毛处皮肤颜色、质地未见异常,死亡5只大鼠,死亡率为25%。灵芝孢子粉低剂量组死亡3只大 鼠,死亡率为15%;灵芝孢子粉高剂量组死亡1只大鼠,死亡率为5%。
    2.大鼠体质量方面,随着大鼠肝硬化的加重,大鼠体质量明显减轻,四组的大鼠体质量之间差异有统计学意义,F=58.678,P<0.001,模型组、灵 芝孢子粉低剂量组、灵芝孢子粉高剂量组与对照组之间差异有统计学意义(P值均为P<0.001),灵芝孢子粉低剂量组、灵芝孢子粉高剂量组与模型组之 间差异有统计学意义(P=0.029,P=0.014)。表明造模导致大鼠体质量下降,经灌胃给予灵芝孢子粉后大鼠体质量下降比模型组少。
    3.脏器指数方面,造模后肝指数及脾指数均增大,模型组、灵芝孢子粉低剂量组及灵芝孢子粉高剂量组与对照组相比存在显著性差异(P值均为 P<0.05);对于肝指数,灵芝孢子粉低剂量组及灵芝孢子粉高剂量组与模型组比较有显著性差异(P=0.001,P=0.000)。上述实验结果提示,经灌胃 给予灵芝孢子粉后大鼠肝纤维化程度较模型组轻,肝、脾淤血有所减轻。  
    4.对于反映肝细胞有无受损及严重程度的指标AST及ALT,结果显示,经四氯化碳菜籽油溶液造模后,大鼠AST、ALT均升高;统计显示:模型组、灵 芝孢子粉低剂量组及灵芝孢子粉高剂量组与对照组比较有显著性差异(P值均为P<0.001),灵芝孢子粉低剂量组及灵芝孢子粉高剂量组与模型组比较有 显著性差异(P值均为P<0.05)。上述实验结果提示,经灌胃给予灵芝孢子粉后四氯化碳对大鼠肝细胞的损害程度较模型组为轻。  
    5.对于反映肝细胞蛋白合成代谢功能指标,结果显示,对于ALB,造模后ALB均降低,模型组、灵芝孢子粉低剂量组及灵芝孢子粉高剂量组均与对照 组有显著性差异(P=0.001,P=0.043,P=0.007),灵芝孢子粉低剂量组及灵芝孢子粉高剂量组的ALB与模型组差异不显著,但灵芝孢子粉低剂量组及 高剂量组的ALB均高于模型组。上述实验结果提示,经四氯化碳菜籽油溶液复制大鼠肝硬化模型后,肝脏合成蛋白能力下降,经灌胃给予灵芝孢子粉后肝 细胞蛋白合成代谢功能只是逐渐在恢复。球蛋白增高程度与肝脏疾病严重性相关,故对于GLB,灵芝孢子粉低剂量组、灵芝孢子粉高剂量组与模型组有显 著性差异(P=0.009,P=0.043):而对于A/G值,对照组、灵芝孢子粉低剂量组及灵芝孢子粉高剂量组均与模型组有显著性差异 (P=0.000,P=0.000,P=0.003)。
    6.对于反映肝脏排泄、分泌及解毒功能的指标TBIL,结果显示,造模后TBIL均升高,模型组、灵芝孢子粉低剂量组及灵芝孢子粉高剂量组均与对照 组有显著性差异(P=0.001,P=0.026,P=0.004)。
    7.组织学检查,取肝脏组织,以10%甲醛溶液固定和石蜡包埋制成切片,HE染色,光镜下观察可见:(1)模型组大鼠肝小叶正常结构破坏,肝间质 广泛纤维组织增生,假小叶形成,即大鼠肝硬化动物模型复制成功,成模率为70%。同时可见肝细胞增生反应明显,间质内弥漫性炎细胞浸润。(2)治 疗组大鼠肝小叶结构因纤维组织分割而紊乱,但纤维组织间隔细窄,炎细胞较少,原肝小叶没有被完全分割,镜下未见假小叶形成。
    根据以上研究我们可以得出以下初步结论:(1)在整体水平上,本实验证实灵芝孢子粉对四氯化碳复制的肝硬化大鼠的体质量、脏器指数及肝脏的 血生化指标均有影响,可以降低肝硬化大鼠的脏器指数、氨基转移酶、胆红素,增加其体质量、血浆蛋白的合成。(2)在组织水平上,本实验证实灵芝 孢子粉对四氯化碳复制的肝硬化大鼠的肝脏纤维化程度有所减轻。
 
 
4.期刊论文 吴允凯.王欣.王虎.陈先良.陈飞虎 1H-NMR图谱鉴别安徽金寨产破壁与不破壁灵芝孢子粉 -安徽医科大 学学报2008,43(2)
 
    目的 研究灵芝孢子粉提取物的核磁共振图谱,比较破壁与不破壁灵芝孢子粉的异同.方法 采用不同溶剂微波提取破壁与不破壁灵芝孢子粉,提取物进 行1H-NMR研究,从而实现灵芝孢子粉1H-NMR图谱解析.结果 三氯甲烷提取物的1H-NMR图谱基本相同,而水提取物的1H-NMR图谱存在差异.结论 该方法可用 于灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉的鉴别;对探讨灵芝孢子粉和破壁灵芝孢子粉的药理作用以及灵芝孢子粉的进一步开发利用具有重要意义.
 
5.期刊论文 王云.王洋 灵芝孢子粉免疫调节作用的研究 -中国中医药科技2001,8(2)
 
    灵芝孢子是灵芝繁殖后代的种子.据国内许多资料报道,灵芝孢子粉具有抑制肿瘤、调节免疫、调节神经、调节机能四大药理作用,对很多因机能、神 经不调而引起的疾病效果很好.为了验证灵芝孢子粉的免疫调节作用强弱,作者进行了灵芝孢子粉免疫调节作用的研究.现将研究结果报告如下.
 
 6.学位论文 杨海华 灵芝孢子粉及灵孢多糖对多巴胺能神经元保护作用的实验研究 2006
 
    研究背景
 
    帕金森病(Parkinson'sdisease)是一种常见的中老年进行性神经系统变性疾病,黑质致密部多巴胺能神经元选择性变性、缺失是其主要的病理特征 ,临床上以静止性震颤、运动迟缓、肌张力增高和姿势平衡障碍为主要表现。PD的病因及发病机制至今尚不清楚。目前治疗PD的主要手段仍为多巴胺替代疗法,然而多巴替代治疗并非是针对PD的病因治疗,它并不能延缓或阻止PD的病理进程。
 
    随着疾病的发展,多巴类药物疗效的减退和其越来越多的不 良反应使众多的PD患者在疾病10-15年后陷入药物治疗的困境,迫切需要寻求新的治疗方法来阻止疾病的进展和改善临床症状。 随着帕金森病的研究进展,天然药物在治疗神经退行性病中的作用已经引起广泛的关注。灵芝孢子粉是中医药学宝库中的珍品,它具有抗癌作用 ,抗艾滋病毒,对机体的免疫调节作用,且对受损伤的神经元具有保护作用。灵芝孢子粉中含有多种生物活性物质,有广泛的药理作用。另外有研究发 现灵孢多糖(GanodermalucidumpolysaccharidesGLPS)对于Hypoxia/Reoxygenation引起的大脑皮层神经元损伤具有神经保护作用。因此值得深入研究灵 芝孢子治疗PD的可行性和作用机理,为进一步开发、应用灵芝孢子的有效成份提供线索和依据。
 
    研究目的
    1.探讨灵芝孢子粉对LPS所致的PD大鼠模型的保护作用
    2.研究灵孢多糖对LPS诱导的原代多巴胺能神经元变性的保护作用及相关机制。
     3.研究灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞的保护作用。
     方法和结果
    第一部分在体研究灵芝孢子粉对LPS所致PD大鼠的保护作用
     方法
    1.LPS诱导PD动物模型的制作
    2.动物分组
    对照组:脑立体定向手术右侧黑质注射PBS。
    LPS模型组:脑立体定向手术向右侧注射20μgLPS(LPS浓度为5mg/ml)。
    LPS+灵芝孢予粉组:先用灵芝孢子粉灌胃3天,立体定向注射LPS,继续灌胃14天,直至处死。
    3.动物行为学观察
    4.TH、OX-42、TNF-α及iNOS染色结果观察
     5.RT-PCR检测TH、TNF-α及iNOSmRNA的表达量
     结果
    1.动物行为学观察 正常对照组未出现旋转行为。LPS组30min旋转次数为(125±12)r,LPS+灵芝孢子粉组30min旋转次数为(94±3)r,两组比较差别有显著性意义 (p<0.01)。
    2.免疫组化法检测灵芝孢子粉对TH表达的影响 各组均检测到TH的阳性细胞表达,正常对照组存活的TH阳性细胞数最多,LPS+灵芝孢子粉组有所减少,LPS组存活的TH阳性细胞数量较前两组均减少 ,两处理组阳性细胞差异有统计学意义(P<0.01)。
    3.OX-42染色结果 正常对照组Mic呈现典型的"分枝样",LPS注入黑质14d后大部分Mic活化,胞体增大,突起变短,增粗,细胞数量明显增多。灵芝孢子粉+LPS组中 的Mic数目较单纯LPS组明显减少,视野中有"分枝样"Mic。
    4.免疫组化检测PD大鼠黑质TNF-α及iNOS的表达 正常对照组可见少量TNF-α和iNOS阳性细胞的表达,LPS处理后的两组可见TNF-α及iNOS阳性细胞表达均明显增多,组间比较可见单纯LPS组的TNF- α及iNOS阳性细胞增多程度高于灵芝孢子粉+LPS组(P<0.01)。
     5.RT-PCR检测PD大鼠术侧中脑TH、TNF-α和iNOSmRNA表达
    在正常对照组中有较多量的THmRNA表达,TNF-α及iNOSmRNA有少量表达,LPS处理后的两组可见THmRNA表达减少,而TNF-α和iNOSmRNA的表达量则明 显升高,在LPS+灵芝孢子组中其THmRNA表达量较LPS组的表达量增多,TNF-α和iNOSmRNA的表达低于LPS组,各组间比较有显著性差异(p<0.01)
    第二部分体外研究灵孢多糖对DA能神经元的保护作用及相关机制
    方法
    1.LPS诱导DA能神经元损伤细胞模型的建立在乳鼠原代中脑神经元和神经胶质细胞共培养基础上,待细胞生长6至7天后,选取每孔密度大约是 6×105个的细胞,随机分为6组,换用新鲜培养基,每孔培养液为2mL,同时加入不同干预因素,每组样本至少为5个,作用时间为24小时。
    正常对照组:DMEM细胞培养液培养。单纯GLPS组:不加LPS,而加入GLPS,终浓度为300μg/mL。LPS组:加入LPS使其终浓度为20ng/mL。GLPS预处理 组3组:在加入终浓度20ng/mL的LPS之前30min加入GLPS,终浓度分别为50,100,300μg/mL。
    2.免疫组化检测TH、OX-42、TNF-α和iNOS阳性细胞的表达。
     3.RT-PCR检测TH、TNF-α及iNOSmRNA的表达含量。
    结果
    1.免疫组化检测GLPS对TH细胞及小胶质细胞激活和数量的影响。在正常未予干预的共培养体系中具有较多的TH阳性细胞的表达,LPS处理后,TH阳性 细胞数明显减少,但在PS+GLPS100μg/mL及LPS+GLPS300μg/mL组中,TH阳性细胞数量较单纯LPS组明显增多,对照组Mic体积较小,为分枝状,数量也 较LPS组减少,在GLPS300μg/mL组中,未发现激活的小胶质细胞,Mic总数量也较LPS组明显减少,说明GLPS对小胶质细胞没有激活作用。LPS组,LPS诱 导前的Mic体积较小,LPS诱导后细胞体积明显增大,为圆形或吞噬状,数量明显增多。LPS+GLPS50μg/mL中Mic大部分被激活,其激活的Mic数量及Mic总 量上与LPS组无明显差异。但在LPS+GLPS100μg/mL及LPS+GLPS300μg/mL组中,激活的小胶质细胞明显被抑制,细胞总数较LPS组明显下降。
    2.免疫组化检测共培养体系中TNF-α,iNOS的阳性细胞表达 在正常未予干预的共培养体系中仅有少量的TNF-α,iNOS阳性细胞表达,LPS处理后,TNF-α,iNOS阳性细胞数明显增多,经不同剂量的 GLPS(100μg/mL和300μg/mL)处理后,TNF-α,iNOS阳性细胞数较LPS组明显下降(P<0.01)
    3.RT-PCR检测TH,TNF-α和iNOSmRNA的表达
    对照组和GLPS300μg/mL组中有少量的TNF-αmRNA,iNOSmRNA表达,THmRNA的表达量较高。LPS处理24h后,TNF-αmRNA,iNOSmRNA表达则明显增多 ,THmRNA的表达量明显减少,LPS+GLPS50μg/mL中TNF-αmRNA,iNOSmRNA表达量较LPS组的表达量稍低,但无统计学意义 (P>0.05),LPS+GLPS100μg/mL及PS+GLPS300μg/mL中TNF-αmRNA、iNOSmRNA表达量较LPS组的表达量明显降低,而THmRNA的表达量较LPS组的表达量明 显增高(P<0.01)。
    第三部分灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞的保护作用
方法
    1.分组
    空白对照组:在细胞培养体系中不加入任何药物;单纯GLPS处理组:在细胞培养体系中加入300μg/mlGLPS;
    Mpp+处理组:在细胞培养体系中加入 MPP+; GLPS+MPP+处理组:在细胞培养体系中加入GLPS预处理30min,再加入MPP+继续处理48h,GLPS终浓度分别为100μg/ml、200μg/ml及300μg/ml。
     2.细胞活力测定(MTT法)。
    3.LDH水平检测。    
    4.免疫组化检测TH表达。
     结果
    1.MTT法检测的PC12细胞活力的变化不同剂量MPP+(0-1mm/L)处理后24h,细胞活力逐渐下降,呈剂量-依赖关系。单纯GLPS处理48h后,细胞活力与对 照组比较无明显差异,说明单纯的GLPS处理对PC12细胞活力没有明显影响。单纯Mpp+(0.4mm/L)处理48h后,细胞活力明显下降,为对照组的52.14%,在 Mpp+(0.4mm/L)处理前30min加入不同剂量的GLPS(100、200和300μg/ml)后,细胞活力较单纯MPP+处理组的细胞活力有明显的提高,分别为 65.41%,75.42%,78.54%。
    2.LDH检测:单纯的GLPS处理48h后,细胞中的LDH活性较对照组无明显差异,说明GLPS对PC12无毒性作用。MPP+处理48h后,上清中LDH水平较对照组 明显增加,经不同浓度的GLPS预处理后,上清中的LDH水平较MPP+组明显下降。
    3.TH免疫组化检测 在对照组及GLPS单纯组有较多的TH阳性细胞的表达,MPP+处理后,TH阳性细胞数明显减少,表达强度减弱。但在MPP++GLPS300μg/mL组中,TH阳性 细胞数量较单纯LPS组明显增多。
    结论
    1.灵芝孢子能有效地降低LPS诱导的PD大鼠模型行为学改变的发生,减少SNpc的DA能神经元的损伤。
    2.研究发现灵孢多糖对于LPS诱导损伤的DA能神经元具有保护作用。
     3.灵孢多糖可抑制Mic的激活,减少iNOS及TNF-α的表达,从而起到保护DA能神经元的作用。
     4.灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞具有保护作用。
 
 7.期刊论文 张冠群.李艳.陈海珍.谢毅锋 灵芝及虫草菌丝体中微量元素含量的分析 -广东微量元素科学2000,7(4)
 
    利用原子吸收光谱法和分光光度法对人工培育的灵芝、灵芝孢子粉、虫草菌丝体中具有重要生理意义的元素锌、铁、锰、镁、锗进行了检测,比较了 灵芝子实体、灵芝孢子粉、虫草菌丝体中5种元素的含量,探讨了5种元素的药理作用.
 
8.学位论文 胡居吾 菌草灵芝及孢子粉作为保健食品原料实验研究 2006
 
    我国是世界上生产和食用灵芝的大国。但是这些灵芝都是以阔叶林段木栽培的,由于阔叶林生长周期长,大量生产段木灵芝对森林资源消耗量大 ,不利于林业资源的合理利用和环境保护,而且增加了栽培的成本。
    菌草灵芝的培养料是利用人工栽种的象草、五节芒、芦苇和巨菌草等为原料生产灵芝,这些原料来源丰富,价格低廉,大大降低了成本,而且在栽 培过程中不需要木材,此技术避免了大量砍伐树木而导致生态平衡的破坏,本技术已获得了国家发明专利,已逐渐在全国推广。
    关于段木灵芝方面的研究很多,有大量的文献可查,技术和方法都比较成熟,但是对菌草灵芝的研究不是很多。
     本文研究参照段木灵芝相关较成熟的研究方法对菌草灵芝与段木灵芝与功效成分进行比较研究,探讨了菌草灵芝中的粗多糖、三萜类物质的含量和 孢子油的含量和得率,并比较了菌草灵芝与不同产地的段木灵芝的差异。此外,对菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油中脂肪酸的组成及含量进行了比较 研究。
    目前国内外的研究人员还没有做这些方面的研究。为此,我们进行了菌草灵芝与段木灵芝的比较研究,以便为菌草灵芝作为保健食品原料的开发利 用提供实验依据。
     本论文主要研究内容和主要的研究方法:
     1、概述了灵芝化学成分、药理作用、临床作用及保健作用研究进展。
     2、应用硫酸-苯酚比色法测食品中的粗多糖的含量而且分别用葡萄糖做标准品和用葡聚糖做标准品时,测量结果是否有差异。
    3、利用水提或醇提等提取方法提取分离出段木灵芝和菌草灵芝中多糖或三萜类物质,并测定它们的含量。
    4、利用石油醚和超临界萃取技术提取段木灵芝和菌草灵芝孢子油,确定了最佳提取条件。
    5、利用气相色谱法分析孢子油中脂肪酸的组成及含量,比较段木灵芝孢子油和菌草灵芝孢子油的差异。
    6、通过动物实验,作了菌草灵芝孢子粉增强免疫力功能和对小鼠化学性肝损伤有辅助保护功能的实验研究。
    结果及结论:
    1、用葡萄糖来做标准品和用葡聚糖做标准品测食品中的粗多糖含量时,前者测的结果稍偏高,大约高4.8%,但葡聚糖标准品的价格昂贵且在国内 难于买到,故可以用葡萄糖来代替葡聚糖做标准品。
     2、从实验结果中可,菌草灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油的含量及得率都明显高于各地的段木灵芝。菌草灵芝中的粗多糖含量比各地的段木 灵芝分别高于27%(福建泰宁)、38%(山东莒县)、20%(安徽金寨);菌草灵芝中的三萜类物质含量比各地的段木灵芝分别高于39%(福建泰宁)、34%(山 东莒县)、34%(安徽金寨);菌草灵芝中的粗多糖得率比各地的段木灵芝分别高于21%(福建泰宁)、28%(山东莒县)、44%(安徽金寨)。从上述数据可以 看出菌草灵芝优于段木灵芝,从而为在全国范围内广推广提供了证据。
    3、用石油醚提取段木灵芝和菌草灵芝孢子油的得率分别为23.3%和25.4%。并且段木灵芝孢子油呈棕红色,而菌草灵芝孢子油呈黄色。
    4、用超临界CO2萃取孢子油,在最佳萃取条件下段木灵芝和菌草灵芝孢子油的得率分别为28.73%和29.89%。两者的色泽大致相同,呈黄色。
    5、两者的孢子油经气相色谱法,结果表明两者色谱图非常相似,但菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油脂肪酸含量不同。
    6、研究菌草灵芝孢子粉对小鼠的免疫调节作用。120只SPF级昆明种雌性小鼠平均分成3组,其中菌草灵芝孢子粉分0.075g/kg?bw、 0.150g/kg?bw、0.450g/kg?bw三个剂量组给小鼠灌胃,对照组给等体积的蒸馏水,共30天。测定小鼠的体重、免疫器官脏器/体重比值、迟发型变态反 应(DTH)、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力、抗体生成细胞数、半数溶血值(HC50)、单核—巨噬细胞碳廓清、巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率指标。结果 表明,0.150g/kg?bw剂量能提高小鼠的半数溶血值(P<0.05)。0.450g/kg?bw剂量能提高小鼠迟发型变态反应(DTH)能力、ConA诱导的淋巴细胞转化能 力、增加抗体生成细胞数(P<0.05)。菌草灵芝孢子粉对小鼠体重增长、胸腺体重比值、脾脏体重比值、单核-巨噬细胞碳廓清能力、小鼠巨噬细胞吞噬 鸡红细胞的能力均无明显影响(P>0.05)。结论:菌草灵芝孢子粉具有增强免疫力的功能。
    7、研究菌草灵芝孢子粉对小鼠化学性肝损伤有辅助保护作用。50只SPF级昆明种雌性小鼠平均分成3组,其中菌草灵芝孢子粉分0.075g/kg?bw、 0.150g/kg?bw、0.450g/kg?bw三个剂量组给小鼠灌胃,对照组给等体积的蒸馏水,共30天。然后分别以50%乙醇(12mL/kg?bw),造成急性肝损伤,观 察小鼠的体重、血清肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)的活性及丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)的含量。结果表明,在50%乙醇肝损伤模型中,菌草灵芝孢子 粉可以非常显著地抑制肝损伤小鼠的血清MDA值的升高,并能提高其血清GSH的活性。在50%乙醇肝损伤模型中,分别以中浓度和高浓度的菌草灵芝孢子 粉肝脏保护作用最好。说明菌草灵芝孢子粉可以抑制乙醇产生的自由基造成的脂质过氧化,抑制过多的自由基和脂质过氧化物对肝细胞的破坏作用,从 而达到保护肝脏的作用。结论:菌草灵芝孢子粉具有很好的肝脏保护作用,其作用可能与其很好的抗氧化作用有关。
 
9.期刊论文 灵芝及灵芝孢子粉——天然保健珍品(下篇) -老年教育(长者家园版)2007,""(12)
 
灵芝的药理作用:
1、灵芝用于治疗神经衰弱,改善睡眠,提高记忆力 国家药典中灵芝就是有效的安眠宁神之药,对属气血两虚者疗效更好.灵芝对神经衰弱失眠的疗效与其镇静作用有关,亦与中医药学所载灵芝能"安神"、 "增智慧"、"不忘"相符.
 
10.期刊论文 张楠楠.刘娟.陆叶 灵芝孢子粉的真伪鉴别 -黑龙江医药科学2001,24(2)
 
灵芝为多孔菌科真菌灵芝Ganoderma Lucidum(leyss. ex Fr)Karst或紫芝G.japonicum(Fr) Lloyd的干燥子实体入药。主含麦角甾醇、有机酸、甘露 醇、氨基酸、多肽等化学成分。主要用于神经衰弱、头晕失眠、消化不良、慢性支气管炎、冠心病、心绞痛、高血脂、高血压、肝炎等。用量 1.5~3g,除此以外,尚对皮肤有美容作用,并有良好的防病保健效果。至此,在日本、韩国、及我国灵芝产品在一部分人中已成为每天必服的保健品。 特别是近几年来,市场上出现了许多灵芝制品,已形成了一股灵芝治百病的热潮。目前,灵芝粉(子实体直接磨制而成)应用范围较大。我们在研究中药 鉴定时,发现灵芝粉中掺有伪品海金沙Lygodium japonicum(Thunb)SW的成熟孢子情况。它们即不是同科属,且药理作用、功效也不相同。为保证人们用 药的安全有效,现将二者鉴别特征分述如下。
 
 
引证文献(25条)
 
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本文来源:http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_tjzyxyxb200204033.aspx
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